Widełki replikacyjne są strukturami powstającymi podczas replikacji DNA, kiedy cząsteczka DNA jest kopiowana. Są to miejsca na obu końcach nici ulegającej replikacji.
Mają kształt litery Y. Następuje w nich podział podwójnej helisy DNA na dwie oddzielne nici, które służą jako matryce dla syntezy nowych nić DNA.
Widełki replikacyjne powstają w wyniku rozplecenia podwójnej helisy DNA i są niezbędne, aby do nici mogły przyłączyć się enzymy przeprowadzające proces replikacji.