Aby przeprowadzić tę reakcję, należy najpierw przygotować roztwór próbek do badania, np. poprzez rozpuszczenie białka w wodzie lub buforze. Następnie do każdej próbki dodaje się niewielką ilość roztworu CuSO4 oraz roztwór NaOH, co prowadzi do utworzenia kompleksu Cu2+ i OH-. Po dodaniu kolejnego roztworu, zwanego roztworem Biuretu, dochodzi do reakcji peptydów i kompleksu Cu2+-OH-. Ta reakcja powoduje zmianę charakterystycznego zabarwienia roztworu z niebieskiego do fioletowego lub różowego.
Reakcja biuretowa pozwala na wykrycie obecności białek w roztworze poprzez reakcję związków zawierających grupę peptydową.