Na obrazie widoczni są liczni ludzie, którzy padają ofiarami aktów przemocy i chaosu. Ukazuje on masakrę, która miała miejsce w noc św. Bartłomieja w 1572 roku, podczas której katolicy zaatakowali protestanckich hugenotów we Francji. W centrum obrazu można dostrzec grupę żołnierzy, którzy dokonują morderstw i ataków na niewinnych ludzi. Widoczne są również liczne zwłoki ofiar rzezi, które gęstą ścielą ulice miasta — leżą one na ziemi, zwisają z okien, a nawet dryfują w wodach rzeki. Rozmiary masakry w nocy św. Bartłomieja były olbrzymie. Szacuje się, że w wyniku tych wydarzeń zginęło od kilku do kilkunastu tysięcy hugenotów. Było to akt, który wstrząsnął nie tylko Francją, ale całą Europą. Wymowa obrazu jest silnie krytyczna wobec przemocy religijnej i fanatyzmu. Autor dążył do przekazania przesłania o tragicznych konsekwencjach nienawiści religijnej i wskazania na potrzebę pojednania i poszanowania różnic wyznaniowych.
Masakra w nocy św. Bartłomieja stała się symbolem brutalności i nietolerancji religijnej, jednocześnie pogłębiając nienawiść i podziały między katolikami a protestantami. To wydarzenie przyspieszyło rozprzestrzenianie się konfliktów religijnych w Europie i miało długotrwałe skutki dla stabilności politycznej regionu. Masakra w nocy św. Bartłomieja stała się jednym z najbardziej tragicznych epizodów w historii religijnych konfliktów we Francji.